實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
恒河猴腎細胞;MMK2 | 貼壁生長 | EY-X63736 |
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細胞名稱 恒河猴腎細胞;MMK2
形態(tài)特性: 上皮樣,多角形
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞來源于一雌性獼猴的腎組織。2000年由中國科學(xué)院昆明細胞庫建立。
培養(yǎng)條件: M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法(-)
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Luteolin 5-methyl ether
CAS No.:58115-29-0
中文名:木犀草素-5-甲醚
分子式:C16H12O6
噻酰草;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 趨因子C基元受體1(XCR1) 規(guī)格: 0.1g
硅唑;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 趨因子C基元配體2(XCL2) 規(guī)格: 0.1g
螺;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 趨素(CHEM) 規(guī)格: 0.1g
芐呋;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 趨素(CHEM) 規(guī)格: 0.1g
基畏;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 超氧物歧酶(SOD) 規(guī)格: 0.1g
基阿維菌素;純品型;標準品( 訂購|咨詢 超氧物歧酶1(SOD1) 規(guī)格: 0.1g
京平(格泊素)對照品;有報告 訂購|咨詢 超氧物歧酶1(SOD1) 規(guī)格: 20mg
D水蘇糖;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 超氧物歧酶1(SOD1) 規(guī)格: 1g
鞣花;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 超氧物歧酶1(SOD1) 規(guī)格: 0.1g
基小檗 訂購|咨詢 超氧物歧酶1(SOD1) 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
6″O木糖苷 訂購|咨詢 博來水解酶(BLMH) 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
檸檬酯C 訂購|咨詢 斯鈣素1(STC1) 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
巨大戟5,20縮3當(dāng)歸酯 訂購|咨詢 斯鈣素1(STC1) 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
Dapagliflozin 訂購|咨詢 斯鈣素2(STC2) 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
長春 訂購|咨詢 聯(lián)會復(fù)合體蛋白3(SYCP3) 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
異丹葉大黃素 訂購|咨詢 聯(lián)會蛋白(GMNN) 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
訂購|咨詢 葡萄糖6異構(gòu)酶(GPI) 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg
無水檸檬 訂購|咨詢 葡萄糖6異構(gòu)酶(GPI) 規(guī)格: HPLC≥98%;100mg
GTSE1/G2 and S phase expressed 1 G2期/S期應(yīng)答相關(guān)蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Cytisine
HIPK4 同源相互作用蛋白激酶4抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Irbesartan
AMBRA1 自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml 5'O(4,4'Dimethoxytrityl)thymidine3'Osuccinic acid
IBRDC2/RNF144B E3泛素蛋白連接酶144B抗體(環(huán)指蛋白144B) 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml D(−)Salicin
JMY 連接介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml D(−)Salicin
LRDD/PIDD 富含亮重復(fù)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Magnolol
MCG10 RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Magnolol
NME6/IPIA ALPHA P53誘導(dǎo)細胞凋亡抑制蛋白α抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Esomeprazole magnesium trihydrate
銀 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Anthraquinonesulfonicacidsodiumsaltmonohydrate 含量:BR,99%
吲哚甲 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Indolecarboxaldehyde 含量:BR,強度1200
吲哚 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IUPAC 含量:USP級,95%
吲哚 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IAANa 含量:生物技術(shù)級,770ug/mg
吲哚鉀 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IPAK 含量:BR,1%
吲哚 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IPA 含量:高純,98%
吲哚丁鉀 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IBAK 含量:BR,780µg/mg
吲哚丁 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IUPAC 含量:BR,0.4%
吲哚酚β葡糖苷 進口、國產(chǎn) 英文名稱:IndoxylGlucoside 含量:BR
茚滿 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Indan 含量:AR,99.8%
恒河猴腎細胞;MMK2鐵細菌培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于鐵細菌的分離培養(yǎng)
Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格:250g用途:用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB、SN標準)
YEP培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于膿桿菌的增菌培養(yǎng)
志賀氏菌顯色培養(yǎng)基規(guī)格:1000ml用途:用于志賀氏菌顯色培養(yǎng)
Candida Elective 瓊脂規(guī)格:250g用途:用于食品中Candida及酵母菌總數(shù)測定
卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)規(guī)格:250g用途:用于金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng),需添加50%卵黃乳液(Japan方法)