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    人和動(dòng)物細(xì)胞的標(biāo)本采集的選擇與處理是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的*步，若選擇與處理不當(dāng)，將會(huì)直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)，現(xiàn)將基本要求和注意事項(xiàng)敘述如下：

一、標(biāo)本采集的基本要求

(一)標(biāo)本的采集

1．新鮮標(biāo)本組織易于培養(yǎng)成功，取材時(shí)應(yīng)在4～6h內(nèi)盡快能制作成細(xì)胞，盡快培養(yǎng)，若不能即時(shí)培養(yǎng)，應(yīng)將標(biāo)本組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，于4℃存放。若標(biāo)本組織塊較大，應(yīng)在清除表面血塊、壞死組織、脂肪和結(jié)締組織后，將其切成1cm3以下的小塊于培養(yǎng)液內(nèi)4℃存放，但時(shí)間不能超過(guò)24h。

2．若對(duì)所取標(biāo)本材料懷疑有污染，應(yīng)將所取標(biāo)本組織在含高濃度青、(400～800U／ml)甚至加入適量的的培養(yǎng)液于4℃下存放2h以上，再用PBS洗2～3次，以確保所取標(biāo)本材料無(wú)菌。

3．所取標(biāo)本材料應(yīng)避免紫外線的照射；避免接觸有毒有害的化學(xué)物質(zhì)，如碘、汞等。

4．標(biāo)本取材應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等，一般來(lái)講，胚胎組織較成熟個(gè)體組織容易培養(yǎng)，分化低的較分化高的組織容易生長(zhǎng)，腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng)。

5.原代細(xì)胞取材時(shí)要同時(shí)留好組織學(xué)標(biāo)本和電鏡標(biāo)本。對(duì)組織的來(lái)源、部位、包括供體的一般情況要做詳細(xì)的記錄，以備以后查詢(xún)。

(二)材料與器材

    需要取材的各類(lèi)組織；平衡鹽溶液；手術(shù)刀、眼科剪、鑷子、止血鉗、；平皿、小燒杯、三角燒瓶、無(wú)菌的大頭針、75％酒精棉球；消毒過(guò)的木板、蛋架等。

二、各類(lèi)組織標(biāo)本的取材技術(shù)

(一)皮膚和黏膜標(biāo)本的取材

1.皮膚和黏膜是上皮細(xì)胞培養(yǎng)的重要組織來(lái)源，主要取白于手術(shù)過(guò)程中的皮片，方法似外科取斷層皮片手術(shù)操作，但面積一般2～3cm3即可，局部不留瘢痕，但取材時(shí)不要用碘酒消毒。

2．若培養(yǎng)上皮細(xì)胞，取材時(shí)不要切取太厚，盡可能去除所攜帶的皮下或黏膜下組織；若培養(yǎng)成纖維細(xì)胞，則反之。

3．皮膚黏膜因表面細(xì)菌、真菌很多，標(biāo)本取材時(shí)應(yīng)嚴(yán)格消毒，必要時(shí)要用高濃度抗菌素和適量漂洗、浸泡。

(二)內(nèi)臟和實(shí)體瘤標(biāo)本的取材

1．內(nèi)臟標(biāo)本除消化道外基本是無(wú)菌的；實(shí)體瘤標(biāo)本若沒(méi)有壞死或潰破基本也是無(wú)菌的。

2．內(nèi)臟和實(shí)體瘤標(biāo)本取材時(shí)要明確和熟悉所需組織的類(lèi)型和部位。

3．實(shí)體瘤標(biāo)本取材時(shí)要取腫瘤細(xì)胞豐富的區(qū)域，要避開(kāi)破潰、壞死液化部分，以防污染。

4．由于成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)給以后的培養(yǎng)工作增加困難，因此要除去不需要的部分如血管、神經(jīng)，尤其結(jié)締組織。

(三)血液細(xì)胞標(biāo)本的取材

1．一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細(xì)胞，操作嚴(yán)格無(wú)菌，盡量新鮮使用。

2．血液細(xì)胞標(biāo)本取材時(shí)應(yīng)注意抗凝，通常采用肝素抗凝，常用肝素濃度為8～10U／ml血，肝素濃度過(guò)大導(dǎo)致溶血。若從血站取來(lái)的獻(xiàn)血員的血液，因常用含枸櫞酸鹽抗凝，對(duì)此類(lèi)血標(biāo)本不能用含鈣、鎂離子的洗液來(lái)處理細(xì)胞以免加速血液中促進(jìn)血液凝固而影響收獲血細(xì)胞及淋巴細(xì)胞。

(四)骨髓、羊水、胸／腹水細(xì)胞標(biāo)本的取材

    嚴(yán)格無(wú)菌操作，注意抗凝，盡快分離培養(yǎng)。離心后，用無(wú)鈣、鎂離子PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。

(五)動(dòng)物組織取材

1．鼠胚組織取材

(1)引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物，將其整個(gè)浸泡在含有75％酒精的燒杯中2～3s(時(shí)間不能太長(zhǎng)，以避免酒精從口或其他通道進(jìn)入體內(nèi)，影響組織活力)。

(2)從含有75％酒精的燒杯中取出動(dòng)物，在消毒木板上可用無(wú)菌的圖釘或大頭針固定四肢，用無(wú)菌止血鉗挾起皮膚、用無(wú)菌眼科剪沿軀干中部環(huán)形剪開(kāi)皮膚，用止血鉗分別挾住兩側(cè)皮膚拉向頭尾，把動(dòng)物反包，暴露軀干，然后再固定。

(3)更換無(wú)菌解剖器材，采用無(wú)菌操作法解剖取出胚胎，置于無(wú)菌平皿中。

2．幼鼠胚腎(或肺)取材幼鼠采用上述方法處死消毒后：

(1)腹部朝上固定在木板上，先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側(cè)，然后采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺。

(2)或背部朝上固定在木板上，先將背部毛皮切開(kāi)、游離并拉向兩側(cè)，然后采用無(wú)菌法從背部打開(kāi)腹腔取腎。

(六)雞(鴨)鳥(niǎo)類(lèi)胚胎組織取材

1．取孵化至適當(dāng)胚齡(9～12d)的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有豐富血管、胚體有運(yùn)動(dòng)的胚蛋，說(shuō)明胚體發(fā)育良好，并用有色筆畫(huà)出氣室和胚體位置。

2．將胚蛋置于蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，用75％酒精棉球擦干，再經(jīng)碘酒、75％酒精消毒后，在無(wú)菌條件下采用無(wú)菌法用剪刀或中號(hào)鑷子打開(kāi)氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼，再用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚，再用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無(wú)菌平皿中，解剖取材。