實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2) | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63263 |
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細(xì)胞名稱(chēng) 犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)
形態(tài)特性: 上皮樣;多角
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 1958年,MadinSH和DarbyNB從表觀正常的成年雌性科克獵犬的腎建立了MDCK細(xì)胞株。角蛋白陽(yáng)性。該細(xì)胞曾被用于研究β淀粉前體蛋白的形成及其蛋白水解產(chǎn)物的分類(lèi)。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2~1:6傳代;2~3天換液1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法(-)
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293Ad5形態(tài)特性: 上皮樣;多角生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)人胎球蛋白B酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒
人涎腺癌細(xì)胞;ACC-M形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human KLK3 ELISA KIT
人肝癌細(xì)胞;Hep-3B[Hep3B]形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Rabbit MMP-2 ELISA Kit
人胎盤(pán)絨膜癌細(xì)胞;BeWo形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human HVEM ELISA KIT
;HEL形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Mouse Endocan ELISA KIT
人成骨肉瘤細(xì)胞;MG-63形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human PBEF ELISA KIT
人髓樣甲狀腺腫瘤細(xì)胞;TT形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Bovine IL-10 ELISA Kit
人胸腺激酶缺陷細(xì)胞;143BTK-形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)兔轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒
人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞;T24形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Human IL-2(High Sensitivity) Elisa Kit
人成骨肉瘤細(xì)胞;Saos-2形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Porcine PDGF-AA ELISA KIT
人正常肝細(xì)胞;L-02形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Porcine PDGF ELISA KIT
人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞;U937[U-937]形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Bovine IL-1α ELISA KIT
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Rabbit Prolactin ELISA KIT
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Rat Adiponectin ELISA KIT
人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞;Daudi形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Human IL-6(High Sensitivity) Elisa Kit
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;Jurkat,CloneE6-1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng) Chicken GDF-15 Elisa Kit
犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒BDNFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白細(xì)胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒BDNFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒BDNFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠嗜粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒Beta-naphtholELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠嗜粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA試劑盒BFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒BFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒BFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒BFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。