實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1 | 貼壁生長 | EY-X63647 |
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細(xì)胞名稱 大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 大鼠腎小球系膜細(xì)胞,貼壁生長,常用于腎病發(fā)生機(jī)理的臨床研究,也可用干構(gòu)建動物摸型。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Rocaglamide
CAS No.:84573-16-0
中文名:楝酰胺
分子式:C29H31NO7
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TEM7R/Plxdc2 腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記相關(guān)蛋白質(zhì)7抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Gestodene
phosphoLSP1 (Ser252) 白細(xì)胞F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Hexareline
MAP3K2/MEKK2 絲裂原活蛋白激酶激酶2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Iloperidone
IFNA4/IFNA76/IFNA M1 干擾素α4抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Iloperidone
Ryanodine Receptor 心肌蘭尼受體抗體(腦肌蘭尼受體) 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Imipenem monohydrate
GCMA/GCM1 絨毛膜特異性轉(zhuǎn)錄因子GCMa抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Imipenem monohydrate
Desmocollin 1 橋粒糖蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Indapamide
UACA 葡萄膜自身抗原Uaca抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Indapamide
菊粉 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Inulin 含量:生物技術(shù)級,98%
橘 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Citrinin 含量:組織培養(yǎng)級,10KU/ml
聚(L乳) 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:PLA 含量:BR,99%
聚(甲基甲酯) 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:PMMA 含量:3.5N
聚硅 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Silicone 含量:基準(zhǔn)試劑,99%
聚合甲 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Paraformaldehyde 含量:BR,98%
聚茴腦磺 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Polyanetholesulfonicacidsodiumsalt 含量:4N,99.99%
聚賴 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:εPL 含量:BR,95%
聚麥芽三糖酶 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:Pullulanase 含量:BR,5′(NNNNNN)3′
聚四氟 進(jìn)口、國產(chǎn) 英文名稱:PTFE 含量:AR
大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1XLD培養(yǎng)基平板(9cm)規(guī)格:10個/包用途:選擇性培養(yǎng)基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門氏菌
LAMVAB瓊脂規(guī)格:250g用途:用于食品中乳菌的分離培養(yǎng)或計數(shù)
葡萄球菌選擇性瓊脂規(guī)格:250g用途:用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
包姜氏瓊脂培養(yǎng)基(不含瓊脂)規(guī)格:250g用途:用于百日咳菌分離培養(yǎng)
緩沖蛋白胨水(BPW)規(guī)格:250g用途:用于配制腸球菌檢測用稀釋液
卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)規(guī)格:50%卵黃乳液用途:5ml