細胞名稱 大鼠乳腺癌細胞;MADB106
形態(tài)特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞系由F344大鼠的肺轉(zhuǎn)移瘤分離并建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況: C7
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
大鼠乳腺癌細胞;MADB106 | 貼壁生長 | EY-X63646 |
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
3'-Methoxyrocaglamide
CAS No.:189322-69-8
中文名:3'-甲氧基楝酰胺
分子式:C30H33NO8
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PAP1/Acid Phosphatase 性酶抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Etonogestrel
Bone Alkaline Phosphatase/AKP2 骨性酶抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Everolimus;RAD001
Prostatic Acid Phosphatase 前列腺性酶抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Fluocinolone Acetonide
Oncostatin M 癌基因蛋白抑瘤素M抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Fluocinolone Acetonide
CDR2/PCD17 小腦變性相關(guān)蛋白2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Flupirtine maleate
HLC3/Kanadaptin 肺癌癌基因蛋白3抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Flupirtine maleate
OVCA2 卵巢癌相關(guān)基因2蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Fulvestrant
PRUNE/DRES17 癌相關(guān)蛋白DRES17抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Gestodene
鯨蠟 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Hexadecane 含量:AR,99%
鯨蠟*基銨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:CTAC 含量:BS
鯨蠟*基銨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:CTAB 含量:AR
肼單 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Hydrazinemonohydrochloride 含量:BR,98%
肼黃 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Tartrazine 含量:AR,65%
肼基 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Phenylhydrazine 含量:CP,98%
酒精元 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Nigrosinealcoholsoluble 含量:超純,98%
酒石二鉀半水合物 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Potassiumtartratehemihydrate 含量:CP,98%
酒石 進口、國產(chǎn) 英文名稱:D(+)Tartaricaciddisodiumsalt 含量:BR,98%
酒石鐵(III) 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Ferrictartrate 含量:3N
大鼠乳腺癌細胞;MADB106葡萄糖半固體培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于志賀氏菌的復(fù)合生化試驗(GB標準)
Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)顆粒規(guī)格:300ml/袋*10用途:用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB、SN標準)
含225ml布氏肉湯均質(zhì)袋規(guī)格:10個/包用途:用于空腸彎曲菌的前增菌
桔汁瓊脂規(guī)格:250g用途:用于飲料中耐細菌的分離培養(yǎng)
BBL瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標準)
大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)顆粒規(guī)格:300ml/袋*10用途:一種通用的營養(yǎng)培養(yǎng)基,用于各種微生物的培養(yǎng)(GB/T16294-2010)