實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HT-29 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63288 |
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細(xì)胞名稱 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HT-29
形態(tài)特性: 上皮樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞是1964年由FoghJ用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離的。近來(lái)，已建株的培養(yǎng)細(xì)胞用含血清的McCoy's5a培養(yǎng)基培養(yǎng)。該細(xì)胞系在裸鼠中成瘤，也能在類固醇處理的地鼠中成瘤。該細(xì)胞可合成IgA、CEA、TGFβ結(jié)合蛋白和黏液素；表達(dá)受體，但沒(méi)有檢測(cè)到血漿酶原活性；不表達(dá)CD4，但細(xì)胞表面表達(dá)半乳糖神經(jīng)酰胺（HIV的可能替代受體）。該細(xì)胞系癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos陽(yáng)性；p53基因過(guò)表達(dá)，并且在273位密碼子處發(fā)發(fā)生G
培養(yǎng)條件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)5%FBS
傳代方法: 1:3~1：8傳代；每周2~3次換液。
傳代情況: P143
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
小鼠雜交瘤細(xì)胞；ZMA1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)Anti-AKT1 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞；16G12形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)Anti-BTLA Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞；ZMA6形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)Anti-CENPH Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞；ZMB5形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)Anti-SIGLEC15 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞；LCDV-V形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞；WSSV-A形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)Anti-FLT4 Polyclonal Antibody
小鼠雜交瘤細(xì)胞；VEGF形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性: 半貼壁生長(zhǎng)Anti-CASP3 Polyclonal Antibody
L-MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb2-溴-6-氟甲
L-氨酸MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb5-吡-2-羧酸
L-Presenilin 1 AntibodyN-基-哌啶酮
L-(標(biāo)準(zhǔn)品)PSD95 (7E3) Mouse mAb5-溴-2-酚
L-β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氟-溴吡啶
L-(標(biāo)準(zhǔn)品)β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)異
L-(sigma)NUT (C52B1) Rabbit mAb2--5-并噻唑
DL-CD11c (3.9) Mouse mAb (APC Conjuga)2--并噻唑
肌氨酸Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb1-溴-3,二甲氧基烷
-DL-Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb2',3'-異叉腺苷
L-亮氨酰RalBP1 (I33) Antibody5-?；?2-甲基吡啶
蒜氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Nicastrin Antibody3,二酮
L-ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb環(huán)戊
DL-ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb2,5-二氟
L-(標(biāo)準(zhǔn)品) Tuberin/TSC2 (28A7) Rabbit mAb氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽
L-Histone H2A (L88A6) Mouse mAb鄰三氟肼
DL-賴氨酸CD14 (61D3) Mouse mAb (APC Conjuga)六水硝酸銩
DL-鹽酸鹽Histone H3 (96C10) Mouse mAb2,二氟
左旋肉；T；Histone H3 (96C10) Mouse mAb(氟甲酰)酸
;左旋肉（標(biāo)準(zhǔn)品）PRC1 Antibody-氟
L-鈉，一水Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb2,二氟
L-谷氨酰(標(biāo)準(zhǔn)品)Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb氟-1,2-二
（還原型）Notch Isoform Antibody Sampler Kit1,1,1-三氟-2,戊二酮
L-（標(biāo)準(zhǔn)品）Helios (D4Z6D) Rabbit mAb2-溴-5-硝基三氟甲
（氧化型）Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)
L-高;(S)-2-氨基-羥基丁酸BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAb羥基吡咯并[2,d]嘧啶
DL-異BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAb溴三
L-賴氨酸鹽酸鹽SATB1 (P472) Antibody
L-鹽酸鹽T2 (D6C7K) Rabbit mAb (Mouse Specific)2,4,6-三(2-吡啶基)三
L-天CDC73 (A264) Antibody三基氧翁四氟酸
L-天(標(biāo)準(zhǔn)品)CDC73 (D410) Antibody2-三氟甲基吡啶
L-半胱酸鹽酸鹽無(wú)水物SATB1 (L745) Antibody羥基-6-(三氟甲基)嘧啶-2-硫
L-對(duì)硝基酰cdc25A Antibody2-硝基咪唑
;S-羧甲基-L-半Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Sepharose® Bead Conjuga)三氟肼
S-芐基-L-半GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)(三氟甲基)肼
L-鹽酸鹽GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)3',4'-二氟酮
胞樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Anti-CD63 Polyclonal Antibody
結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HT-29大鼠艾杜糖硫酯酶(IDS)ELISA試劑盒CD30ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒CD44ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒CD4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠(trypsin)ELISA試劑盒CD6ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒CD8ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)ELISA試劑盒CDK-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒CDK5ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒CDl4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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