公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞;HFTF | 貼壁生長 | EY-X63306 |
細胞名稱 胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞;HFTF
形態(tài)特性: 成纖維細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 北京眼科研究所建系。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2~1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況: P9
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
?
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
EHDAB;十六烷基二甲基基eIF4B Antibody2--氟吡啶
十二烷基二甲基基eIF4B Antibody三氟磺酸酮
十四烷基二化銨Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (redFluor™ 710 Conjuga)甲氧基-5-三氟
HDBAC;十六烷基二化銨Malic Enzyme 2 (E1N3F) XP® Rabbit mAb三氟甲
十烷基*基化銨Grp75 (D13H4) XP® Rabbit mAb三基酸叔丁酯
辛基*基化銨;八烷基*基化銨Grp75 (D13H4) XP® Rabbit mAb氟-羥基甲酸
2-溴基*基Calmodulin (D1F7J) Rabbit mAb對氟
溴基*基(BPTAB)eIF2B-ε Antibody2--6-并噻唑
十二烷基二化銨Phospho-eIF2α (Ser51) (119A11) Rabbit mAb2-溴-氟磺酰
DDAB;雙十烷基二甲基Phospho-eIF2α (Ser51) (119A11) Rabbit mAb溴-氟磺酰
雙十二烷基二甲基FLI1 (D7N5M) Rabbit mAb(1R,2R)-1,2-二基二
L-賴氨酸DNMT3A (D23G1) Rabbit mAb2-亞甲基-1,
L-賴氨酸SimpleChIP® NRIP1 Upstream Primers氨?;?/span>
L-EpCAM Antibody4,6-二甲基-2-甲磺酰基嘧啶
L-(標準品)Phospho-BLNK (Tyr96) AntibodyH-HIS(TRT)-OH
L-Phospho-BLNK (Tyr96) Antibody(5-甲基異惡唑-基)甲
L-(標準品)Cdc7 Antibody4,二氟酰酸酯
L-(標準品)CDC37 (V367) Antibody2-氟-5-三氟酸
L-SNAT1/SLC38A1 (D9L2P) Rabbit mAbBoc-1-氨基環(huán)戊烷羧酸
L-鹽酸鹽DIDO1 Antibody氟甲
DL-RanGAP1 (D2T7T) Rabbit mAb2-(三酰)吡咯
L-NCAM (CD56) Antibody三氟化-二甲絡(luò)合物
L-異(標準品)NEDD4 (C5F5) Rabbit mAb1-(2-甲氧基)哌
L-異Notch1 (D1E11) XP® Rabbit mAb二氟溴酸
L-CDK10 (D8Z7Z) Rabbit mAb氨基甲酰
DL-Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) Antibody1,1,1-三三氟烷
L-氨酸Tuberin/TSC2 Antibody五氟烷
L-天冬酰;L-天冬酰一水 Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571) Antibody2-氨基-3,5-二溴吡啶
L-(標準品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) Antibody全氟己基烷
L-Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) Antibody1-叔丁基-
L-HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb3,5-二甲基哌啶
L-鹽酸鹽HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb4,5-二甲基噻唑
L-半Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1254) Antibody氨基-羥基磺酰
L-半(標準品)Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) (5B12) Rabbit mAb2,3,4,5-四甲氧
L-半鹽酸鹽,一水Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) (5B12) Rabbit mAb1,5-二-戊酮
DL-半CDC37 (V297) Antibody2,5-二甲氧基
性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-DSC2 Polyclonal Antibody
胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞;HFTF大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒CTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒CTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒CTGFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA試劑盒CTGFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠抗IVIgG抗體ELISA試劑盒CTGFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒CTLA-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒cTn-ⅠELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒cTn-ⅠELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。