公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞;SRSV/3T3 | 貼壁生長 | EY-X63504 |
細胞名稱 小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞;SRSV/3T3
形態(tài)特性: 圓形
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 這株細胞是NIH/3T3細胞用SRS小鼠腹水瘤無細胞提取物感染并在體外傳代。在感染過的NIH/3T3細胞的細胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)了A型和C型病毒顆粒。發(fā)現(xiàn)細胞中有逆轉(zhuǎn)錄酶和自由的白血病病毒前病毒-DNA。用這個培養(yǎng)細胞對BALB/c裸鼠進行皮下接種,誘導生成纖維肉瘤。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況: PN
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
rmE-Selectin (CD62E)/Fc, CF (100 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;DV2-M14 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmES31-like, CF (10 UG)細胞名稱: 發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞;G1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmErbB4/Fc, CF (50 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;3F16A4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmErbB3/Fc, CF (50 UG)細胞名稱: 小鼠胚胎干細胞;LT04 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmEpo, CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;DV2-M6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmEpo R/Fc, CF (50 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;CHGF-001 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmEpo (10 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;CHGF-002 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmEpiregulin, CF (50 UG)細胞名稱: 高背鯽魚尾鰭細胞;GBJd M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
rmEpiregulin (50 UG)細胞名稱: 大鼠癌細胞;CHGF-003 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmEpigen, CF (25 UG)細胞名稱: 人胚肺成纖維細胞;MRC-5 M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)10%FBS
rmEpigen (25 UG)細胞名稱: 人胚肺二倍體細胞;HEL-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rmEphrin-B2/Fc, CF (200 UG)細胞名稱: 人胚腎二倍體細胞;HEK-2 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
rmEphrin-B2/Fc Biot (25 UG)細胞名稱: EB病轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞(彝族);KM934 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
rmEphrin-B1/Fc, CF (200 UG)細胞名稱: 人細胞;HeLa DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%NBS
rmEphrin-B1/Fc Biot (25 UG)細胞名稱: 大鼠耳蝠皮膚細胞;BMS2 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
rmEphrin-A4/Fc, CF (200 UG)細胞名稱: 大蹄蝠皮膚細胞;GRBS1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞;SRSV/3T3人促胰液素/分泌素受體(SR)ELISA試劑盒OT/BGPELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胃抑素(GIP)ELISA試劑盒OTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胸腺表達趨化因子(TECK/CCL25)ELISA試劑盒OTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人(Thymosin)ELISA試劑盒OTF2AELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人(TP-5)ELISA試劑盒OTF2BELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒ovariancancermarker-CA125ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胰多肽(PP)ELISA試劑盒OVAsIgEELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒OVAsIgEELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。