實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
小鼠胚胎干細(xì)胞;LT04 | 貼壁生長 | EY-X63715 |
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細(xì)胞名稱 小鼠胚胎干細(xì)胞;LT04
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
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CARD6 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Cefquinome sulfate
CARD8 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Ceftiofur Sodium
CARD9 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Ceftiofur Sodium
CARD17/INCA 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Cytidine5'triphosphate(CTP) disodium salt dihydrate
TP53I11 腫瘤蛋白P53誘導(dǎo)蛋白11抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Voglibose
ZNF420 鋅指蛋白420抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Voglibose
ZNHIT1/CGBP1 細(xì)胞周期蛋白1結(jié)合蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Brivanib alaninate
p53AIP1 p53調(diào)節(jié)凋亡誘導(dǎo)蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Gentiobiose
鎘 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Cadmiumbromide 含量:2N,200目
銫 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Cesiumbromide 含量:BR,95%
十四基*基銨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:TTAB 含量:AR,粉末
四庚銨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Tetraheptylammoniumbromide 含量:4N,99.8%
四甲基銨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:TMAB 含量:AR,99%
四銨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:TMD0 含量:AR,99.8%
铔 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Ammoniumbromide 含量:AR,99.8%
啶 進口、國產(chǎn) 英文名稱:EB 含量:高純
銀 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Silverbromide 含量:AR,98%
紅 進口、國產(chǎn) 英文名稱:BCP 含量:BR,99%
小鼠胚胎干細(xì)胞;LT04MUCAP試劑規(guī)格:4ml*2支用途:用于沙門氏菌快速篩選
胨化乳規(guī)格:250g用途:培養(yǎng)基原材料
硝鹽快速檢測試劑盒拉丁屬名:食物種類: 蔬菜、水果、牛乳制品等。
MS培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于植物組織培養(yǎng)
抑制劑(大豆)規(guī)格:0.5g詳情介紹
吡羅紅B規(guī)格:10g詳情介紹