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產(chǎn)品展示   ProductsATCC細胞>>轉化細胞>>胚腎細胞;293Cells,lowpassage
 
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產(chǎn)品名稱:
胚腎細胞;293Cells,lowpassage
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  胚腎細胞;293Cells,lowpassage的詳細資料:

公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:

產(chǎn)品名稱

生長特性

貨號

胚腎細胞;293Cells,lowpassage

貼壁生長

EY-X63493

細胞名稱  胚腎細胞;293Cells,lowpassage
形態(tài)特性: 上皮細胞

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 293細胞是胚胎腎細胞用剪切過的腺病毒5DNA轉化得到,它們包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1,包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1,能互補E1失活的腺病毒突變株和載體,使其生長;在DNA轉染檢測中它們是特別有效的受體細胞;對于大多數(shù)即使不是全部人腺病毒的生長和溶菌斑測試,它們也表現(xiàn)很好。這些細胞廣泛應用于因缺失或代換E1序列引起的E1失活突變株和腺病毒載體的繁殖與滴定;因此它們被用來構建腺病毒載體,用于構建腺病毒載體使用低代數(shù)細胞,一般不超過40代,對于保持這株細胞的優(yōu)良特性,正確的細胞培養(yǎng)方法十分重要。

培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質胎牛血清,10%

傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。

傳代情況: P(27+5)

凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
rmIL-12 p40 Homodimer, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBG19-4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-12 p40 Homodimer (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HB10.2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-12 (50 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBG3-5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-12 (10 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBG10-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-11, CF (5 UG)細胞名交瘤細胞系;HybridLivercellGLH04 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-11, CF (25 UG)細胞雜交瘤細胞系;HybridLivercellGLH03 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-11 Ra/Fc, CF (200 UG)細交瘤細胞系;HybridLivercellGLH02 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-11 Ra/Fc (200 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBNI8 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-11 (5 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBPE9 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-11 (25 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBBrE-2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-10, CF (5 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;UK1-3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-10, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;FIB2-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-10 Ra, CF (25 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;UK1-87 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-10 Ra (25 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系;TPA1-41 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-10 (Cys149Tyr), CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HBPG11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

rmIL-10 (Cys149Tyr) (10 UG)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;FIB1-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
胚腎細胞;293Cells,lowpassage人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)ELISA試劑盒NGFELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人纖調蛋白(fibromodulin)ELISA試劑盒NHE3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒NKBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

T細胞急性淋巴母細胞白血病相關抗原(TALLA-1/CD231)ELISA試劑盒NLRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人蛋白C(ProteinC)ELISA試劑盒N-MID-OTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人膠原凝集素(Collectin)ELISA試劑盒NMP-22ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)ELISA試劑盒NNEELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒NN-T4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

 

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