實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
腦多型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;BT-325 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63726 |
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細(xì)胞名稱 腦多型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;BT-325
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞系于1985年由北京神經(jīng)外科研究所建立。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
傳代方法: 1:3傳代;3-4天一次
傳代情況: PN4
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 熒光法(-)
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Orientin 2''-O-rhamnoside
CAS No.:81398-30-3
中文名:
分子式:C27H30O15
cis紫莖女貞苷B (95%) 訂購(gòu)|咨詢 彈性蛋白微原纖維界面因子2(EMILIN2) 規(guī)格: 10mg
異虎耳草素 訂購(gòu)|咨詢 彈性蛋白微原纖維界面因子2(EMILIN2) 規(guī)格: 20mg
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紅景天苷 訂購(gòu)|咨詢 蛋白C(PROC) 規(guī)格: 20mg
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蟾靈 訂購(gòu)|咨詢 蛋白C抑制因子(PCI) 規(guī)格: 20mg
SIRT4/SIR 2 like protein 4 沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白4抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Gracillin
TRIB3/p65 interacting inhibitor of NFkappaB 神經(jīng)細(xì)胞死亡誘導(dǎo)蛋白激酶抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Yohimbine HCl
SERCA1 ATPase 肌漿/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Yohimbine HCl
GRK5 G蛋白偶聯(lián)受體激酶5抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Phentolamine mesilate
EDG3 內(nèi)皮分型G蛋白偶聯(lián)受體3抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Phentolamine mesilate
TNFAIP3 interacting protein 3/ABIN3 腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)相互作用蛋白3抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Vemurafenib,PLX 4032
RISC/Serine carboxypeptidase 1 絲羧肽酶1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Praeruptorin E
APS APS抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Praeruptorin A
亞錫 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Tin(II)oxide 含量:CP,98%
青 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Piperacillin 含量:BR,牛心,95%
野靛 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Cytisine 含量:BR
野黃芩甙 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Scutellarin 含量:AR,95%
葉綠醌 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:VK1 含量:顯色劑
葉綠素A 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:ChlorophyllA 含量:BR,中粘度200
葉綠素 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Chlorophyll 含量:BR,85%
葉綠素鎂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:ChlorophyllB 含量:BR,低粘度100
葉綠銅 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Chlorophyllin 含量:BR,98%
葉 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:PGA 含量:色固
腦多型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;BT-325強(qiáng)化梭菌鑒別瓊脂(DRCA)規(guī)格:250g用途:用于食品和其它物質(zhì)中梭菌的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)
四硫磺鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB)規(guī)格:250g用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)
念珠菌顯色培養(yǎng)基規(guī)格:1000ml用途:用于念球菌分離和鑒定,白色念珠菌顯綠色
煙測(cè)定培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于嬰兒食品和乳粉中煙和測(cè)定
XLT4瓊脂規(guī)格:250g用途:用于食品中致病菌,特別是沙門氏菌分離培養(yǎng)
動(dòng)力-硝鹽培養(yǎng)基規(guī)格:20支詳情介紹