綜合微生物的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:
(1)前期準備:(A)滅菌處理;(B)制備Biolite水;(C)檢查設備和材料;
(2)按比例配制培養(yǎng)材料;
(3)導入曝氣,進行繁殖培養(yǎng);
(4)取液觀察;(a)取液;(b)稀釋菌液;(c)平板培養(yǎng);
(5)分離并檢測;
(6)取液儲存;通過該綜合微生物培養(yǎng)方法簡單可操作性強,培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內(nèi),菌類穩(wěn)定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
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規(guī)格參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
pETBlue-2 | pETBlue-2 | EY-J963287 |
資源名稱: pETBlue-2
種屬: pETBlue-2 plasmid
提供形式: 質(zhì)粒干粉
安全等級: 1
模式菌株: no
應用領域: 質(zhì)粒載體
培養(yǎng)基: 原核抗性:Amp; 克隆菌株:DH5α; 培養(yǎng)條件:37℃。LB培養(yǎng)基,含50μg/mL氨芐鈉。
存儲條件: 4℃避光保存;運輸條件:常溫運輸。
低溫存法:
①簡單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1~2個月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3~4個月;②液氮超低溫保存法,將生長穩(wěn)定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法保存。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成酸性的營養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進罐,常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng),有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級種子,把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級種子,將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱為四級發(fā)酵。
Trameshirsuta 中文名稱:粗毛栓菌Trameshirsuta分離基物:空氣提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0014;馬鈴薯、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基:(PDA);馬鈴薯提取液1.0L,葡萄糖20.0g,瓊脂15.0g,pH自然。[注]馬鈴薯提取液生長條件:25℃;好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Alcaligenesfaecalis 中文名稱:糞產(chǎn)桿菌Alcaligenesfaecalis提供形式:凍干物安全等級:2模式菌株:no應用領域:《GB4789.28培養(yǎng)基:和試劑的質(zhì)量要求》標準菌株。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002;營養(yǎng)肉汁瓊脂;蛋白胨5.0g,牛肉浸取物3.0g,NaCl5.0g,瓊脂15.0g,蒸餾1.0L,pH7.0。[注]培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mgMnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:37℃;存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:95%
Brachybacriumnesrenkovii 中文名稱:涅氏小短桿菌Brachybacriumnesrenkovii分離基物:牛奶提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0033;LB培養(yǎng)基:(LBMedium);蛋白胨10.0g,酵母5.0g,NaCl10.0g,瓊脂15.0g,蒸餾1.0L,pH7.0。生長條件:28℃;好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:95%
Bradyrhizobiumelkanii 中文名稱:埃氏慢生根瘤菌Bradyrhizobiumelkanii分離基物:大豆提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes應用領域:分類學研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0009;根瘤菌培養(yǎng)基:-1(Rhizobiummedium);酵母1.0g,10.0g,土壤提取液200ml,瓊脂15.0g,蒸餾800ml,pH7.2。土壤提取液生長條件:30℃;好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Bacilluseiseniae 中文名稱:蚯蚓芽胞桿菌Bacilluseiseniae分離基物:蚯蚓腸道提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes應用領域:芽胞桿菌分類鑒定模式菌株:。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002;營養(yǎng)肉汁瓊脂;蛋白胨5.0g,牛肉浸取物3.0g,NaCl5.0g,瓊脂15.0g,蒸餾1.0L,pH7.0。[注]培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mgMnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:30℃;好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Bacillusmycoides 中文名稱:蕈狀芽胞桿菌Bacillusmycoides提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:《GB4789.28培養(yǎng)基:和試劑的質(zhì)量要求》標準菌株。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002;營養(yǎng)肉汁瓊脂;蛋白胨5.0g,牛肉浸取物3.0g,NaCl5.0g,瓊脂15.0g,蒸餾1.0L,pH7.0。[注]培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mgMnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:30℃;好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法500 純度:98%
Enrococcusdurans(Streptococcusdurans) 中文名稱:耐久腸球菌(堅韌鏈球菌)Enrococcusdurans(Streptococcusdurans)安全等級:1模式菌株:yes應用領域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:116或114生長條件:37℃ 純度:≥98%
Enrococcus cecorum 中文名稱:盲腸腸球菌Enrococcus cecorum分離基物:雞盲腸提供形式:凍干安全等級:1模式菌株:yes應用領域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:哥倫比亞血平板生長條件:37℃,5%CO2,24h,鏡檢為陽性球菌。 純度:97%
pETBlue-2PALCAM Listeria selective-Supplement acc.to van Netten et al PALCAM人膀胱平滑肌細胞cDNA3-乙烯基苯AU1 tag peptide AU1 tag標簽多肽
李斯特氏菌選擇添加劑人尿道上皮細胞cDNA3-乙烯基苯Glu-Glu Tag peptide Glu-Glu Tag多肽蛋白
L-PALCAM-Listeria selective enrichment broth( base) acc.van Netten et al. L-PALCAM 李斯特氏菌選擇富集肉湯(基礎)人膀胱基質(zhì)成纖維細胞cDNA3-乙烯基苯CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環(huán)核苷陽離子通道蛋白α2抗原
Peptone water( buffered) 緩沖蛋白胨水人前列腺上皮細胞cDNA鹽金剛乙胺CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase) C型鈉尿肽抗原
Phenol-re broth( base) 酚紅肉湯(六亞)人前列腺成纖維細胞cDNA鹽金剛乙胺CNTF(Ciliary Neurotrophic Factor) 睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗原
Plate count agar Casein-peptone dextrose yeast extract agar人前列腺平滑肌細胞cDNA3-基苯factor V(Vcoagulation factor) 5抗體
平板計數(shù)瓊脂/酪蛋白右旋糖酵母瓊脂人顱骨造骨細胞cDNA3-基苯Collagen III (Anti-Collagen Type III ) 抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)
Plate count skim milk agar平板計數(shù)脫脂乳瓊脂人滑膜細胞cDNA3-基苯Collagen III (Anti--Collagen Type III ) Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)