細胞名稱 豹貓肺成纖維樣細胞;LCL2
形態(tài)特性: 成纖維細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞系來源于一雌性豹貓的肺組織。2000年由中國科學院昆明細胞庫建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%NBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P4
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法(-)
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
豹貓肺成纖維樣細胞;LCL2 | 貼壁生長 | EY-X63795 |
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
甲型肝炎病IgM抗體檢測試劑盒細胞名稱: 人慢性髓系白血病細胞;K562形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣;圓形Hepatitis A virus IgM antibody
幽門螺桿菌抗體檢測試劑盒細胞名稱: 人T淋巴細胞白血病細胞;HuT78形態(tài)特性: 淋巴母細胞helicobacter pylori antibody
黃熱病抗原檢測試劑盒細胞名稱: 人前列腺癌細胞;LNCaPcloneFGC[LNCaP.FGC]形態(tài)特性: 上皮樣;梭形YFV-Ag
凋亡相關蛋白TFAR19檢測試劑盒細胞名稱: 人結直腸腺癌細胞;LS174T[LS174T]形態(tài)特性: 上皮細胞TFAR19
抗鼠抗體檢測試劑盒細胞名稱: 人腎上腺神經(jīng)母細胞瘤細胞(腦轉(zhuǎn)移);KP-N-NS形態(tài)特性: 其他antimous antibody
流行性腦膜炎球菌抗原檢測試劑盒細胞名稱: 人肺腺癌細胞;Lu-165形態(tài)特性: 上皮樣細胞Epidemic Meningococcus
圍脂滴蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 人癌細胞;MDA-MB-453形態(tài)特性: 上皮細胞樣Perilipin
CCDC49抗體檢測試劑盒細胞名稱: 人肺腺癌細胞;LTEP-a-2形態(tài)特性: 上皮細胞樣CCDC49 Antibody
丙型肝炎病IgM抗體檢測試劑盒細胞名稱: 人癌細胞;MDA-MB-435S形態(tài)特性: 紡錘形Hepatitis C virus IgM antibody
α-N-乙?;肴樘擒彰笝z測試劑盒細胞名稱: 人急性淋巴母細胞性白血病細胞;MOLT-4形態(tài)特性: 淋巴母細胞α-N-Acetylgalactosaminidase
四旋蛋白1檢測試劑盒細胞名稱: 人小細胞肺癌細胞;NCI-H446形態(tài)特性: 上皮樣Tetraspanin 1
小亞基鈣蛋白酶2檢測試劑盒細胞名稱: 人大細胞肺癌細胞;NCI-H460[H460]形態(tài)特性: 上皮樣Calpain small subunit 2
小亞基鈣蛋白酶1檢測試劑盒細胞名稱: 人腎癌細胞;OS-RC-2形態(tài)特性: 上皮細胞樣Calpain small subunit 1
半胱氨蛋白酶抑制劑4檢測試劑盒細胞名稱: 人肝癌細胞;QGY-7701[QGY7701]形態(tài)特性: 上皮細胞樣Cystatin 4
XIII A1檢測試劑盒細胞名稱: 人前列腺癌細胞;PC-3[PC3]形態(tài)特性: 上皮樣coagulation factor XIII A1
絲氨蛋白酶抑制因子1檢測試劑盒細胞名稱: 人肝癌細胞;QGY-7703[QGY7703]形態(tài)特性: 上皮細胞樣serpin peptidase inhibitor clade A
松弛肽2;松弛素2檢測試劑盒細胞名稱: 人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞;RD形態(tài)特性: 紡錘形細胞和大的多核細胞Relaxin-2
豹貓肺成纖維樣細胞;LCL2百里香酚蘭規(guī)格:25g用途:微生物指示劑
我妻氏培養(yǎng)基基礎規(guī)格:250g用途:用于神奈川現(xiàn)象試驗,需添加兔紅細胞(SN標準)
菌種保存培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于常用細菌斜面?zhèn)鞔笆覝乇4?/span>
改良V-P生化管規(guī)格:20支詳情介紹
葉測定培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于嬰兒食品和乳粉中葉測定
Mannitol salt agar規(guī)格:250g用途:用于金黃色葡萄球菌選擇性分離培養(yǎng)