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產品名稱 | 腎癌細胞;769-P |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63832 |
細胞名稱 腎癌細胞;769-P
形態(tài)特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞系1975年建系,源自一位63歲白人女性的初期透明細胞腺癌組織,細胞呈圓形且邊界不清,核漿比大,有微絨毛及橋粒。該細胞可在軟瓊脂上生長。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:4~1:12傳代,2~3天換液一次
傳代情況: P54
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
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產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生的細胞,以0.25%消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生的細胞用消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。
氧化應激反應誘導凋亡蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;8H5形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣ORAIP
天青殺素;肝素結合蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;3C8形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Azurocidin;Heparin Binding Protein
核外切酶檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;7H11形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣exonucleautomotive service engineers
ATP合酶6檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;10F7形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣ATP synthase6
Trim41分子檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;2F2b形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Tripartite Motif Protein41
Trim5分子檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;3H5形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Tripartite Motif Protein5
前列腺素E代謝物檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;4D11形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Prostaglandin E Metabolite
纖維細胞源性蛋白檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HZAVYL形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Otoraplin
類免疫缺陷病抗體檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;ZMA1形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣immunodeficiency virus antibody
神經源性絲氨蛋白酶抑制劑檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;16G12形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Recombinant Neuroserpin
β內啡肽受體檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;ZMA6形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣βEndorphin receptor
kappa型阿片受體檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;ZMB5形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣kappa Opioid receptor
Ⅱ型膠原螺旋肽檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;LCDV-V形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣type Ⅱ collagen helical peptide
五型腺病抗體檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;WSSV-A形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣Adenovirus5 antibody
分泌性白細胞蛋白酶抑制因子檢測試劑盒細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;VEGF形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣secretory leukocyte protease inhibitor
抗乙糖苷甘露糖抗體檢測試劑盒細胞名胚胎干細胞;HES3.3形態(tài)特性: 上皮細胞樣AMCA
抗細菌鞭毛蛋白抗體檢測試劑胚胎干細胞;E1C2形態(tài)特性: 上皮細胞樣Anti-cBir 1 -IgG
腎癌細胞;769-P蔗糖發(fā)酵管c規(guī)格:10支/盒用途:用于阪崎腸桿菌的生化鑒定。
氨基脫羧酶對照a規(guī)格:10支/盒用途:用于大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌和霍亂弧菌的生化鑒定。
七葉苷發(fā)酵管規(guī)格:10支/盒用途:用于單增李斯特氏菌、志賀氏菌和乳桿菌的生化鑒定。
發(fā)酵管c規(guī)格:10支/盒用途:用于阪崎腸桿菌的生化鑒定。
沙門氏菌生化鑒定試劑盒(GB)規(guī)格:10支/盒用途:用于沙門氏菌的生化鑒定。
8%鹽胨水規(guī)格:10支/盒用途:用于副溶血性弧菌的生化鑒定。