血管活性肽酶抑制劑(VPI)檢測(cè)試劑盒操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液100μl(取1μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同標(biāo)記抗體工作液)100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體
內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體
細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體
外胚層發(fā)育不良抗體
E2 tag標(biāo)簽抗體
鐵螯合酶抗體
DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體
上皮細(xì)胞粘附分子抗體
表皮生長(zhǎng)因子抗體
表皮生長(zhǎng)因子受體3抗體
上皮鈣粘附分子抗體
紅細(xì)胞生成素受體抗體
腦啡肽抗體
EID2蛋白抗體
上皮細(xì)胞粘附分子抗體
紅細(xì)胞膜相關(guān)蛋白ERMAP抗體
腺樣癌特異性相關(guān)抗原抗體EMC1抗體
腺樣癌特異性相關(guān)抗原抗體EMC1抗體
染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1抗體