活化T-細(xì)胞核因子2(NFATC2)ELISA試劑盒?操作步驟
活化T-細(xì)胞核因子2(NFATC2)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
小鼠(mouse cAMP)
小鼠環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(mouse cGMP)
小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(mouse CNTF)
小鼠可溶性CD36分子(mouse sCD36)
小鼠sCD40配體(mouse sCD40 Ligand)
小鼠CD34(mouse CD34)
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(mouse sCD40L)
小鼠補(bǔ)體C3a(mouse C3a)
小鼠補(bǔ)體C5a(mouse C5a)
小鼠血清總補(bǔ)體(mouse CH50)
小鼠肌酸激酶(mouse CK)
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse CK-MB)
小鼠羥甲基賴氨酸(mouse CML)
小鼠C-肽(mouse C-peptide)
小鼠心肌鈣蛋白T
小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(mouse G-CSF)
小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mouse GM-CSF)
小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mouse M-CSF)
小鼠(mouse Cytochrome C)
小鼠雙鏈DNA(mouse dsDNA)
小鼠多巴胺(mouse Dopamine)
小鼠二胺氧化酶(mouse DAO)
小鼠D-二聚體(mouse D-Dimer)
小鼠二肽基肽酶Ⅳ(mouse DPP4)
小鼠β內(nèi)啡肽(mouse β-EP)
小鼠表皮生長(zhǎng)因子(mouse EGF)
小鼠表皮生長(zhǎng)因子受體(mouse EGF R)
小鼠內(nèi)皮素-1(mouse Endothelin-1)
小鼠噬酸性粒細(xì)胞趨化因子(mouse Eotaxin)
小鼠促紅細(xì)胞生成素(mouse EPO)