小鼠心鈉肽(ANP)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒競(jìng)爭(zhēng)法自視判斷
競(jìng)爭(zhēng)法ELISA不易用自視判斷結(jié)果,因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異,一般均用比色計(jì)測(cè)定,讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種,即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。
在競(jìng)爭(zhēng)法小鼠心鈉肽(ANP)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒中,陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量,一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間,此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。
a. 陽(yáng)性判定值法
與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同,ELISA試劑盒但在計(jì)算公式中引入陽(yáng)性對(duì)照A值,現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿,陽(yáng)性對(duì)照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后,先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均值(NCX)和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX),兩個(gè)平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例如0.300),試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)小于2.000,而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而以另2個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算×NCX;如有2個(gè)陰性對(duì)照A超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX,標(biāo)本A值≤陽(yáng)性判定值的反應(yīng)為陽(yáng)性,A>陽(yáng)性判定值的反應(yīng)為陰性。
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合中標(biāo)本對(duì)陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,按下式計(jì)算:
抑制率(%)= ELISA試劑盒(陰性對(duì)照A值-標(biāo)本A值)×100/陰性對(duì)照A值,一般規(guī)定抑制率≥50%為陽(yáng)性,<50%為陰性。
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