OVA sIgG elisa酶聯(lián)免疫試劑盒間接法的步驟
OVA sIgG elisa酶聯(lián)免疫試劑盒間接法:
(1) 抗原包被:用包被液將PEDV抗原作1∶5稀釋包被反應(yīng)板,每孔100μl,同時(shí)設(shè)陰性細(xì)胞培養(yǎng)物對(duì)照孔,置4℃過夜。
(2) 洗滌:用洗滌液洗滌2次,每次2min,瀝干。
(3) 加入被檢血清:用保溫液將被檢血清作1∶100稀釋,加入反應(yīng)板相鄰的兩個(gè)孔中,每孔100μl。同時(shí)作陰、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)照,置37℃孵育1h。
(4) 洗滌3次:方法同上。
(5) 加入酶結(jié)合物:用保溫液將酶結(jié)合物作1∶4 000稀釋,加入反應(yīng)孔中,每孔100μl,置37℃孵育1h。
(6) 洗滌3次:方法同上。
(7) 加入底物:每孔100μl,置室溫暗盒內(nèi)顯色20min。
(8) 加入終止液:每孔50μl,靜置5min。
(9) 測(cè)定OD值:用檢測(cè)儀,于492nm波長(zhǎng),按儀器使用及制定標(biāo)準(zhǔn)要求調(diào)節(jié)儀器,測(cè)定各反應(yīng)孔的OD值,記錄結(jié)果。