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倉鼠Ca-ATP酶試劑盒酶聯(lián)免疫吸附試驗法操作步驟

點擊次數(shù):754 更新時間:2020-05-07

倉鼠Ca-ATP酶(Ca-ATPase)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)操作步驟:

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

[實驗結(jié)果計算]

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

[試劑盒性能]

1. 檢測范圍:0.25 μmol/mL – 8 μmol/mL。

2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 μmol/mL。

3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

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