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豚鼠鐵調(diào)素(HEPC)ELISA檢測試劑盒實(shí)驗操作步驟

點(diǎn)擊次數(shù):977 更新時間:2020-03-04

豚鼠鐵調(diào)素(HEPC)ELISA檢測試劑盒操作步驟

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

80μg/L  5號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40μg/L  4號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20μg/L  3號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10μg/L  2號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5.0μg/L  1號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,

然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.  配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此

重復(fù)5次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 

7.  溫育:操作同3。

8.  洗滌:操作同5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15分鐘.

10.  終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止

液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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