豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒組織結構及原理
豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒組織結構
1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心12分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心60分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液:1000×g離心32分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿:將組織加入適量生li鹽水搗碎。1000×g離心33分鐘,取上清液。
5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
【技術原理】
1、抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
2、結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
3、酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。
4、受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。
5、此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
6、加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好,以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
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