ELISA測試盒測定小分子量物質(zhì)常用的方法
ELISA測試盒測定小分子量物質(zhì)常用競爭法,其標(biāo)準曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關(guān)。標(biāo)準曲線的形狀因。在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本( S)和陰性對照(N)的A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(pati ent)的縮寫,不應(yīng)誤解。ELISA試劑盒為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準,現(xiàn)多為各種測定所沿用。
實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。ELISA試劑盒陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。
因此,這類試劑盒規(guī),如N<0.05<>(或其他數(shù)值),則按0.05計算,否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準品在相同的條件下制作標(biāo)準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA試劑盒,標(biāo)準曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)紙,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。