培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)方法
1、從手術(shù)室無(wú)菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后,仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分,置Hanks液中漂洗一、二次。
2、置于30—50倍體積的Hanks液中,此時(shí)腦組織比較柔軟,反復(fù)吹打即制成細(xì)胞懸液。
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后,細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反復(fù)二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。
4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液,通過(guò)紗網(wǎng)成紗布過(guò)濾,計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。
5、接入培養(yǎng)基瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。
該細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境過(guò)程較長(zhǎng),培養(yǎng)基接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見細(xì)胞分裂現(xiàn)象,然而一旦生長(zhǎng)后即能迅速進(jìn)入旺盛的增殖狀態(tài)。細(xì)胞傳代可以0.25%消化處理。