基因工程抗體及其功能試劑
80年代后人們開始使用基因工程技術(shù)制備抗體,并進(jìn)而將抗體分子片斷與其它蛋白(或另一種抗體分子)融合得到多功能試劑,到目前為止,基因工程抗體在免疫測定上的應(yīng)用尚處于一個(gè)初級階段。且主要是將抗體與其它蛋白以融合蛋白形式表達(dá)而得到多功能試劑,如澳大利亞學(xué)者應(yīng)用基因工程技術(shù)制備了抗人紅細(xì)胞抗體與HIV-1gpN41的融合蛋白。這種重組蛋白,即基因工程雙功能試劑,在此基礎(chǔ)上,建立了快速,靈敏和特異的自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)(AGEN).
3.1 HIV-Elisa抗原/抗體試劑
1998年,美國首先研制第四代試劑,對檢測HIV的同時(shí)檢測P24(核心)抗原,故稱HIV抗原/抗體試劑,國內(nèi)已有引進(jìn).
抗原組成:gp160gp36gp170和單克隆抗p24抗體包被.
3.1.2 P24抗原測定
采用夾心法Elisa,即將將純化的已知抗體包被,當(dāng)加入帶測血清后,若血清中含有P24與包被抗體形成抗原抗體復(fù)合物,再加入酶(HRP)標(biāo)記HIV抗體。在抗原上又結(jié)合了酶標(biāo)記的抗體,加底物 顯色后在酶標(biāo)儀上讀結(jié)果。
近來為提高檢測血清中P24抗原的敏感性,將血清中免疫復(fù)合物(ICD)解離后再進(jìn)行測定。發(fā)展了(ICD) P24抗原測定技術(shù)。
3.1.3抗HIV-Elisa試劑
目前對HIV的檢測原料有了較大改進(jìn),主要如下:
(1)可用于檢測血清或血漿中HIV IgM亞特異性抗體和檢測HIV-1、2和多種亞型。
(2)標(biāo)記的抗原:
a.含HIV-1B亞型gp41和P24的HIV-1重組融合蛋白。
b.可特異性檢測血清或血漿中HIV M群的抗體,絕大多數(shù)HIV-1.0群和HIV-2群的抗體。
c.gp36免疫調(diào)控區(qū)的HIV-2多肽可測定特異性的HIV-2抗體。
d.gp41的倆段HIV 1.0群多肽,可測特異性HIV 1.0 群的抗體 和HIV 1M群的抗體。
從以上抗原設(shè)計(jì)保證HIV的來自不同亞型/或區(qū)域的抗原亞型抗體的檢測。減少了變異株的漏檢。
HIV-1.0.2對759份各類臨床樣品包括401份HIV-1感染不同階段病人樣品,204分HIV-2感染不同階段病人樣品,和154份與HIV無關(guān)的其他疾病患者的樣品的檢測結(jié)果。
特異性:99.93% 靈敏度:100%
對歐洲血液中心的8842份常規(guī)鮮血者樣品用HIV-1.0.2進(jìn)行評價(jià)篩選,并經(jīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)獲得的結(jié)果。
3.1.4 HIV 確認(rèn)試劑—免疫印記(WB或RIBA)試劑
判斷標(biāo)準(zhǔn)
我國 HIV 抗體陽性:至少二條膜帶(即gp160/gp120)或至少一條膜帶和p24(核心)帶同時(shí)出現(xiàn)
美國 HIV-1陽性(任何兩個(gè)中有二條帶(P24 gp41 gp120/gp160), HIV-2無陽性
WHO : HIV -1 陽性(不管有無核心帶或酶帶, 但有兩條膜帶)
HIV-2陽性(不管有無核心帶或酶帶,單有兩條膜帶即為陽性)
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