Hela S3人宮頸癌細(xì)胞 細(xì)胞株類操作步驟
在繼續(xù)介紹Hela S3人宮頸癌細(xì)胞株的操作步驟時(shí),我們需格外注意無菌操作與細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定。接下來,將詳細(xì)闡述細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存的關(guān)鍵步驟:
細(xì)胞復(fù)蘇
1. **預(yù)熱培養(yǎng)基**:將含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基置于37℃水浴鍋中預(yù)熱,確保溫度適宜細(xì)胞生長。
2. **快速解凍**:從液氮罐中迅速取出凍存的Hela S3細(xì)胞,立即放入37℃水浴中,輕輕搖晃凍存管,使其在1分鐘內(nèi)融化。
3. **離心洗滌**:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中,加入等體積預(yù)熱的培養(yǎng)基,輕輕混勻后,以800-1000rpm的速度離心5分鐘,棄去上清以去除DMSO。
4. **重懸接種**:向細(xì)胞沉淀中加入適量預(yù)熱的培養(yǎng)基,輕輕吹打制成單細(xì)胞懸液,隨后接種至已預(yù)先用培養(yǎng)基潤洗的培養(yǎng)皿中,置于37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)與觀察
- **日常觀察**:每日使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)及培養(yǎng)基顏色,適時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基,防止細(xì)胞污染和營養(yǎng)耗盡。
- **換液**:通常每2-3天更換一次培養(yǎng)基,以維持細(xì)胞生長環(huán)境的穩(wěn)定。
細(xì)胞傳代
1. **消化處理**:當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí),吸去舊培養(yǎng)基,用PBS輕輕洗滌細(xì)胞一次,加入適量的消化液,置于培養(yǎng)箱中孵育至細(xì)胞開始變圓并脫落。
2. **終止消化**:加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打使細(xì)胞脫落并分散成單細(xì)胞懸液。
3. **細(xì)胞計(jì)數(shù)與分盤**:取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù),根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整細(xì)胞密度后,接種至新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1. **準(zhǔn)備凍存液**:按培養(yǎng)基:血清:DMSO = 7:2:1的比例配制細(xì)胞凍存液,置于4℃預(yù)冷。
2. **細(xì)胞收集**:同細(xì)胞傳代中的消化處理步驟,收集處于對數(shù)生長期的細(xì)胞。
3. **重懸與凍存**:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管中,逐滴加入預(yù)冷的凍存液,邊加邊輕輕晃動,使細(xì)胞均勻分散。隨后,將凍存管放入程序降溫盒中,置于-80℃冰箱過夜,最后轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。
通過以上細(xì)致的操作步驟,可以確保Hela S3人宮頸癌細(xì)胞株在實(shí)驗(yàn)室中的穩(wěn)定傳代與高效利用。