大鼠腦靜脈血管組織提取物實驗事項
大鼠腦靜脈血管組織提取物實驗事項;
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。
如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。