錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
一抗稀釋的準(zhǔn)備:
方法1. 實(shí)驗(yàn)前,將凍干粉抗體用無(wú)菌蒸餾水稀釋?zhuān)ɑ騊BS稀釋?zhuān)?,將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反復(fù)凍溶。
方法2. 實(shí)驗(yàn)前,也可將凍干粉抗體用無(wú)菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 預(yù)試驗(yàn)可做幾個(gè)梯度1:100、200、400背景高還可做上去,選一個(gè)適合的稀釋比例,再正式做。工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。
二)DAB顯色液的制備實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:在1毫升試劑E(DAB 底物液)中,加入1滴(約50微升)試劑D(DAB濃縮液),混合均勻,即配成DAB工作液。此溶液必須現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后避光保存,6小時(shí)內(nèi)使用,剩余的液體應(yīng)棄去。標(biāo)本顯色時(shí)間一般為室溫 5~20分鐘,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀(guān)察顯色的情況,顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時(shí)脫水封固。